Анализы. Полный медицинский справочник. Ключевые лабораторные исследования в одной книге - Коллектив авторов

4. Раствор нингидрина: 5 г нингидрина на 1 л смеси (к 0,5 г нингидрина прибавляют 95 мл ацетона, 1 мл ледяной уксусной кислоты и 4 мл дистиллированной воды).

5. Гликолол (глицин).

6. Раствор глицина: 150 мг глицина растворяют в 100 мл дистиллированной воды (1 мл раствора содержит 1,5 мг глицина, что соответствует 0,28 мг аминоазота). Из данного раствора глицина готовят серию разведений: 1; 3, 6; 9; 18; 24; 36; 54 мл раствора глицина доводят до 100 мл водой. Приготовленные растворы соответствуют 0,28; 0,84; 1,68; 2,52; 5,04; 6,72; 10,08; 16,12 мг аминоазота в 100 мл.

Растворы стабильны при хранении в холодильнике в течение 1 месяца.

Ход исследования

На фильтровальную бумагу наносят 0,02 мл мочи и после подсушивания окрашивают раствором нингидрина, затем высушивают на воздухе до полного исчезновения запаха уксусной кислоты и помещают в сушильный шкаф при температуре 60 °С на 15 мин.

Окраску опыта сравнивают с окраской стандартных растворов глицина, обработанных так же, как образец мочи, для чего берут по 0,02 мл каждого раствора. Результаты выражают в миллиграммах аминоазота, выделенного с мочой за сутки.

Обнаружение цистина и гомоцистина

Принцип метода

Азид натрия и йод образуют комплекс бурого цвета, который обесцвечивается в присутствии цистина и гомоцистина.

Необходимые реактивы

1. Натрия азид.

2. Йод кристаллический.

3. Раствор йода: 12,69 г кристаллического йода отвешивают в бюксе, растворяют в насыщенном растворе йодида калия (37 г KI в 26 мл дистиллированной воды), переносят в колбу и доливают дистиллированной водой до 1 л. Можно использовать фиксанал йода 0,1 н.

4. Этиловый спирт 96%-ный.

5. Раствор азида натрия: 1,5 г азида натрия растворяют в 50 мл раствора йода и доводят объем этиловым спиртом до 100 мл. Раствор хранят в посуде темного стекла в холодильнике.

Ход исследования

Каплю мочи наносят на фильтровальную бумагу и после высушивания добавляют 1 каплю раствора азида натрия. В течение 5 мин наблюдают за исчезновением бурой окраски.

По времени исчезновения окраски судят о наличии аминокислот в исследуемой моче. Для полуколичественной оценки результатов окраску пробы можно сравнивать с цветной шкалой, для получения которой готовят раствор цистина и гомоцистина, содержащий 0,6 мг каждой аминокислоты в 1 мл.

Из этого раствора готовят растворы с содержанием аминокислот от 0,6 до 0,3 мг/мл. Нижняя граница чувствительности пробы – 0,3 мг/мл.

Бурая окраска в норме исчезает через 2–3 мин после добавления азида натрия.

Ложноположительную реакцию дают ангидрид аргинин-янтарной кислоты, ацетон, некоторые лекарственные препараты.

Тест положительный при наследственной или приобретенной цистинурии или гомоцистинурии, в этом случае окраска остается более 5 мин.

Обнаружение пролина и других аминокислот

Пролинурия возможна при патологии почек и как симптом наследственного нарушения обмена.

Принцип метода

Изатин образует с некоторыми аминокислотами специфически окрашенные соединения.

Необходимые реактивы

1. Изатин.

2. Ацетон.

3. Раствор изатина в ацетоне 0,2 г/л (раствор хранят в холодильнике при температуре 4 °С.

4. Соляная кислота 1 моль/л.

Ход исследования

Фильтровальную бумагу пропитывают раствором изатина в ацетоне и высушивают. Затем наносят на нее одну каплю мочи и высушивают при 100 °С в течение 10 мин, смачивают раствором соляной кислоты и промывают водой.

Сине-серую окраску дает повышенное содержание фенилаланина, коричневую – триптофан, пурпурную – смесь различных аминокислот, а появление синей окраски в виде ободка свидетельствует о присутствии в моче свободного пролина (не менее 0,1 мг/мл). Можно сравнивать интенсивность окраски с цветной шкалой. Для приготовления стандартных растворов, содержащих от 0,1 до 0,5 мг/мл соответствующих аминокислот, используют растворы аминокислот с исходной концентрацией 0,5 мг соответствующей аминокислоты в 1 мл раствора.

Обнаружение кетокислот (проба с треххлористым железом)

Кетокислоты в большом количестве выделяются с мочой при нарушении различных обменных процессов, в частности цикла Кребса; производные фенотиазида или салицилата – при отравлениях ими; 3-оксиантраниловая кислота – при нарушениях обмена триптофана.

Принцип метода

Треххлористое железо в присутствии НСl дает с кетокислотами специфически окрашенные соединения.

Необходимые реактивы

1. Железо треххлористое (FeCl3 × 6Н2О), 10%-ный раствор.

2. НСl, 10%-ный раствор.

3. Аммиак водный концентрированный.

4. Магния хлорид (MgCl2 × 6Н2О): к 11 г хлорида магния прибавляют 20 мл концентрированного водного аммиака и объем доводят водой до 1 л.

Ход исследования

Вариант I – к 0,5 мл мочи добавляют 0,25 мл раствора треххлористого железа, при положительной реакции появляется темно-зеленый осадок.

Вариант II – для связывания фосфатов, мешающих реакции, к 4 мл мочи прибавляют 1 мл раствора хлорида магния, перемешивают и через 5 мин фильтруют. К фильтрату добавляют по 2 капли раствора соляной кислоты и раствора треххлористого железа; в течение 5 мин наблюдают развитие окраски.

О наличии кетокислот судят по характеру окраски, однако следует иметь в виду, что окраска может развиваться и за счет других соединений (табл. 37).

Таблица 37

Цветная реакция различных соединений с треххлористым железом

Обнаружение кетокислот по реакции с 2,4-динитрофенилгидразином

Принцип метода

Кетокислоты образуют с 2,4-динитрофенилгидразином окрашенные гидразоны.

Необходимые реактивы

1. НСl, 2 моль/л.

2. 2,4-динитрофенилгидразин (2,4-ДНФГ): 2 г 2,4-ДНФГ растворяют в 1 л 2 моль/л НСl.

3. Диэтиловый эфир.

4. Натрия карбонат (NaО2СО3), 100 г/л.

Ход исследования

Смешивают 1 мл раствора 2,4-ДНФГ и 0,25 мл мочи. Через 10 мин прибавляют 1,25 мл диэтилового эфира и перемешивают, эфирный слой отсасывают и переносят в пробирку, куда добавляют равный объем раствора натрия карбоната. Содержимое пробирки перемешивают.

При положительной пробе развивается окраска от желтой до оранжево-коричневой. В норме проба отрицательная, окраска не развивается.

Обнаружение гомогентизиновой кислоты

Принцип метода

В щелочной среде гомогентизиновая кислота окисляется с образованием соединений сине-фиолетового цвета.

Необходимый реактив

Едкий натр, 100 г/л.

Ход исследования

К 0,5 мл мочи прибавляют 3–4 капли раствора едкого натра, результат оценивают через 1–2 мин.

При положительной реакции развивается сине-фиолетовое окрашивание, при отрицательной окраска не возникает.

Обнаружение индикана

Принцип метода

Превращение индикана в индоксил после гидролиза эфирной связи сильной минеральной кислотой и последующее окисление индоксила треххлористым железом с образованием окрашенного соединения.

Необходимые реактивы

1. Свинца ацетат (СН3СОО)Рb × 3Н2О), 100 г/л раствора.

2. НСl концентрированная.

3. Железо треххлористое (FeCl3 × 6Н2О).

4. Реактив Обермейра: 0,4 г треххлористого железа растворяют в 100 мл концентрированной НСl.

5. Хлороформ.

6. Натрия тиосульфат (Na2S2O3 × 5H2O), 200 г/л раствора.

Ход исследования

К 4 мл мочи прибавляют 0,4 мл раствора ацетата свинца для осаждения желчных пигментов, солей и