Анализы. Полный медицинский справочник. Ключевые лабораторные исследования в одной книге - Коллектив авторов

10 раз физиологическим раствором. К 90 мл полученного 1%– ного раствора крахмала приливают 10 мл буферного раствора фосфатов с рН 7,2 и 10 мл толуола (при хранении в прохладном и темном месте раствор стоек в течение 3 месяцев). При отсутствии фосфатного буфера 1%-ный раствор крахмала годен в течение нескольких дней.

Для исследования необходим также приблизительно 0,02 н раствор йода: 20 мл 0,1 н раствора отмеривают в мерную колбу емкостью в 100 мл и доводят до метки водой. Можно пользоваться раствором Люголя.

Ход исследования

В штатив ставят 15 пробирок, разливают в каждую пробирку, кроме первой, по 1 мл физиологического раствора. В первую и вторую пробирку наливают по 1 мл испытуемой мочи, смешивают. Из второй пробирки переносят 1 мл смеси в третью, смешивают и 1 мл смеси переносят в четвертую и т. д. до пятнадцатой, из которой 1 мл смеси выливают. Объем жидкости в каждой пробирке 1 мл. Разведения смесей, начиная со второй пробирки: 2, 4, 8 и т. д.

В каждую пробирку наливают по 2 мл 1%-ного раствора крахмала и ставят весь штатив на 15 мин на водяную баню при 45 °C, после чего штатив переносят в холодную воду (для прекращения действия фермента).

После этого в каждую пробирку вносят по одной капле 0,02 н раствора йода и наблюдают за стойкостью окрашивания в пробирках (синего, красно-синего, красного или желтого). Если окраска исчезает быстро, то прибавляют по каплям йод, пока она не будет исчезать в течение нескольких минут.

Расчет

В той пробирке, где жидкость окрашена в синий цвет, диастатического действия нет. Оно закончилось в предыдущей пробирке, которую и берут для Расчета. Например: в шестой пробирке имеется непереваренный крахмал. Вычисляют, какое количество мочи содержится в пятой пробирке (разведение 1 : 16), где нет синего оттенка. 1/16 мл мочи переваривает 2 мл крахмала, 1 мл мочи – 32 мл крахмала.

Результат

d (диастаза) 45° / 15 ‘ = 32 единицы.

Исследование мочевых камней

Мочевые камни могут быть мочекислыми, оксалатовыми, фосфатовыми, цистиновыми.

Необходимые реактивы

1. Соляная кислота.

2. Азотная кислота.

3. Аммиак.

4. Ледяная уксусная кислота.

5. Молибденовокислый аммоний.

6. 30%-ный раствор едкого натра.

Ход исследования

Камень измельчают в ступке. Частицы камня сжигают на листочке платины. Если остаются преимущественно несгорающие частицы – это фосфаты, карбонаты, щавелевокислая известь.

Если частицы сгорают – это мочевая кислота, цистин, ксантин, фибрин. Присутствие оксалатов дает своеобразное красное тление, при этом образуется окись кальция, которая изменяет цвет фенолфталеиновой бумаги, смоченной в воде, на красный. Цистин горит синеватым пламенем и дает запах серной кислоты. Другую часть порошка растворяют в крепкой соляной кислоте. Та часть, которая растворяется, – раствор, нерастворенная часть – осадок.

Осадок

Нерастворенными остаются органические субстанции и мочевая кислота. Осадок отделяют центрифугированием. Часть его осторожно выпаривают в фарфоровом тигле с каплей азотной кислоты до высыхания: мочевая кислота дает покраснение, добавление аммиака – пурпурно-красное окрашивание, а добавление едкого натра – сине-фиолетовое (мурексидная проба).

Другую частицу сжигают на листочке платины. При сгорании мочекислых соединений появляется запах синильной кислоты.

Раствор (солянокислый) может содержать щавелевокислую и сернокислую известь, фосфаты, цистин, ксантин.

Прибавляют немного аммиака, выпадает осадок (II) из фосфатов и оксалатов.

Осадок II отделяют центрифугированием и прибавляют к нему ледяную уксусную кислоту и воду. Растворяются фосфаты (раствор II), нерастворимыми остаются оксалаты, а также цистин. Центрифугируют, получают осадок III.

Осадок III: оксалаты растворяют в соляной кислоте. При нейтрализации аммиаком они вновь выпадают. При сжигании частицы осадка происходит тление и образуется щелочно реагирующий порошок.

Раствор II. Уксуснокислый раствор делят на 2 пробирки. В одну прибавляют немного оксалата аммония. Если в растворе находилась фосфорнокислая известь, то она выпадает в виде кристаллов щавелевокислого кальция. Их отфильтровывают и к фильтрату (раствор II) прибавляют 1/3 объема аммиака. Появление кристаллического осадка указывает на присутствие магнезии и фосфорнокислых солей.

Во вторую пробирку прибавляют несколько капель азотной кислоты и молибденовокислого аммония, слегка подогревают. Пожелтение и выпадение небольшого осадка доказывает присутствие фосфорной кислоты. Это говорит о наличии фосфата кальция.

Проба на карбонаты

На предметное стекло помещают каплю соляной кислоты и немного измельченного камня. Под микроскопом наблюдают за выделением пузырьков углекислоты.

Проба на аммиак

Часть измельченного камня переносят в пробирку и взвешивают в воде, прибавляют немного 30%-ного раствора едкого натра, слегка подогревают, держа над пробиркой красную лакмусовую бумажку. Пары аммиака вызывают посинение бумаги. Если обе последние пробы дают отрицательный результат, то камень не содержит магнезиальных соединений.

Тесты для выявления наследственных и приобретенных нарушений обмена веществ

Исследуют утреннюю порцию мочи.

Обнаружение белка

Проба с бромфеноловым синим

В норме белок в моче не обнаруживают.

Принцип метода

Изменение окраски индикатора в присутствии белка.

Необходимые реактивы

1. 5,5-диэтилбарбитуровой кислоты натриевая соль (мединал).

2. Натрия ацетат (NaOOCCH3 × 3Н2О).

3. НСl 0,1 моль/л.

4. Барбитал-ацетатный буфер рН 8,6: 8,6 г мединала и 6,48 г ацетата натрия растворяют в 100 мл воды, добавляют 60 мл НСl и доводят до 1 л водой.

5. Бромфеноловый синий водорастворимый.

6. Цинка сульфат (ZnSO4 × 7Н2О).

7. Раствор индикатора: 0,5 г бромфенолового синего и 50 г сульфата цинка растворяют в 1 л воды.

8. Уксусная кислота: к 1 мл концентрированной уксусной кислоты добавляют 99 мл воды.

9. Раствор альбумина: 10 г альбумина растворяют в 1 л изотонического раствора хлорида натрия (9 г/л), рабочие растворы альбумина готовят путем разведения основного раствора в 2; 4; 8 и 16 раз водой.

10. Натр едкий 0,02 моль/л.

Ход исследования

На фильтровальную бумагу, предварительно пропитанную барбитал-ацетатным буфером и высушенную, наносят 0,02 мл исследуемой мочи.

После высыхания бумагу с нанесенной пробой окрашивают индикатором, а избыток краски отмывают раствором уксусной кислоты в течение 5–7 мин.

Результат оценивают визуально, сравнивая окраску в опыте с окраской, которую дают стандартные растворы альбумина, обработанные так же, как и опытная проба. Метод позволяет обнаружить в моче белок, содержание которого составляет 2 мкг в пробе.

Проба на гипераминоацидурию

Выделение аминоазота за сутки не превышает 1–2 мг/кг. В ночное время выделяется 2/3–3/4 суточного количества аминоазота.

Гипераминоацидурия возникает при наследственной (синдром Дебре – де Тони – Фанкони) и приобретенной (гломерулонефрит) патологии в почках, а также при некоторых заболеваниях печени. Для выяснения причины гипераминоацидурии необходимы определение концентрации аминокислот в крови и моче и вычисление их клиренса.

Принцип метода

Аминокислоты при нагревании с нингидрином образуют соединения, окрашенные в сине-фиолетовый цвет.

Необходимые реактивы

1. Нингидрин.

2. Ацетон.