Анализы. Полный медицинский справочник. Ключевые лабораторные исследования в одной книге - Коллектив авторов

Большинство качественных проб для обнаружения билирубина в моче основаны на его превращении под действием окислителя в зеленый биливердин или пурпурно-красные билипурпурины, которые, примешиваясь к биливердину, дают синее окрашивание.

Унифицированная проба Фуше

Необходимые реактивы

1. 15%-ный раствор хлорида бария.

2. Реактив Фуше: 25 г трихлоруксусной кислоты растворяют в 100 мл дистиллированной воды и приливают 10 мл 10%-ного раствора хлорного железа (FeCl3).

Ход исследования

К 10 мл мочи прибавляют 5 мл 15%-ного раствора хлорида бария. Смешивают, фильтруют. На вынутый из воронки и расправленный на дне чашки Петри фильтр наносят 2 капли реактива Фуше. Появление на фильтре сине-зеленых пятен говорит о присутствии билирубина. Если реакция мочи щелочная, то необходимо подкислить ее несколькими каплями уксусной кислоты.

Унифицированная проба Розина

Необходимый реактив

1%-ный спиртовой раствор йода.

Ход исследования

В пробирку наливают 4–5 мл мочи и осторожно, по стенкам пробирки, наслаивают раствор йода. Появление на границе между жидкостями зеленого кольца говорит о наличии билирубина.

Проба Готфрида

Принцип метода

Билирубина глюкуронид (холебилирубин) при соединении с диазотированной сульфаниловой кислотой (диазобензосульфоновая кислота) дает розовую окраску за счет образования билирубина.

Необходимые реактивы

1. 10%-ный раствор хлорида бария.

2. Диазореактив: диазораствор I – 5 г сульфаниловой кислоты растворяют в небольшом количестве воды, прибавляют 15 мл концентрированной HCl и доливают до 1000 мл дистиллированной водой.

3. Диазораствор II – 0,5%-ный раствор нитрата натрия. Непосредственно перед определением смешивают 10 мл диазораствора I и 0,25 мл диазораствора II.

4. Спирт этиловый 96%-ный.

5. 6%-ный раствор двузамещенного фосфата натрия.

Ход исследования

К 10 мл мочи, подкисленной несколькими каплями уксусной кислоты, прибавляют 5 мл 10%-ного раствора хлорида бария, перемешивают, фильтруют через бумажный фильтр. Фильтр раскладывают на дне чашки Петри и на осадок, содержащий билирубин, капают 1–2 капли свежеприготовленной диазосмеси, 4 капли спирта и 1 каплю двузамещенного фосфата натрия. При положительной пробе получается красно-фиолетовая окраска.

Этот принцип лег в основу экспресс-тестов для определения билирубина, выпускаемых зарубежными фирмами «Ames» (Англия), «Boehringer» (Германия) и др.

Определение содержания желчных кислот

В нормальной моче содержится минимальное количество желчных кислот. При механической желтухе оно постоянно повышено; часто отмечается увеличение его и при паренхиматозной желтухе. При гемолитической желтухе количество желчных кислот не увеличено.

Проба Гея

Необходимый реактив

Серный порошок.

Ход исследования

40–60 мл фильтрованной мочи оставляют в колбе на 20–30 мин. Затем на ее поверхность насыпают серный порошок. Если частицы серы начинают тонуть, проба положительная (так как уменьшается поверхностное натяжение вследствие увеличения выделения желчных кислот и солей). Проба отрицательная, если серный порошок задерживается на поверхности. Наилучшие результаты получаются при разведении мочи до удельного веса 1,015. Проба становится положительной при концентрации желчных кислот и солей выше 0,01%.

Проба Петтенкофера

Необходимые реактивы

1. Раствор сахара.

2. Концентрированная серная кислота.

Ход исследования

К 10 мл мочи прибавляют небольшое количество раствора сахара и взбалтывают до образования пены. После этого добавляют по каплям концентрированную серную кислоту. При наличии желчных кислот пена становится пурпурно-красной.

Определение содержания уробилиноидов

В моче здорового человека содержатся следы уробилиногена, а за сутки выделяется не более 6 мг, у детей – не более 2 мг.

В свежевыпущенной моче содержится уробилиноген, который при стоянии мочи окисляется в уробилины. Все эти вещества являются производными билирубина и называются уробилиноидами.

Уробилиноиды образуются под действием ферментов бактерий и клеток слизистой оболочки кишечника из билирубина, выделившегося с желчью.

Определение уробилина имеет большое клиническое значение. Присутствие его в количествах, превышающих норму, может быть при гемолитических состояниях (таких как гемолитическая желтуха, гемоглобинурия, некоторые инфекции, например малярия, и др.), при заболеваниях печени (гепатитах, циррозе печени, отравлениях и пр.), при кишечных заболеваниях и лихорадочных состояниях, что связано с токсическим поражением печени. Большое диагностическое значение имеет исследование уробилина в моче при желтухах.

Полное отсутствие уробилина указывает на обтурационную желтуху. Повышение содержания уробилина обнаруживается при паренхиматозной и гемолитической формах желтухи.

Проба Шлезингера

Принцип метода

Появление флюоресценции уробилина за счет образовавшихся цинкуробилиновых комплексов.

Необходимые реактивы

1. Насыщенный спиртовой раствор ацетата цинка (10 г на 100 мл 96%-ного спирта).

2. Раствор Люголя.

Ход исследования

К 4–5 мл мочи приливают равное количество реактива (реактив предварительно взбалтывают) и 1 каплю раствора Люголя. Оставляют на 10 мин, затем фильтруют. Пробирку просматривают на темном фоне в отраженном свете. При наличии уробилина образуется зеленая флюоресценция. Некоторые медикаменты, например атебрин, дают положительную пробу Шлезингера.

Для разграничения настоящей положительной пробы и медикаментозной прибавляют разведенную соляную или серную кислоту. Флюоресценция, вызванная уробилином, исчезает, медикаментозная остается.

Унифицированная проба Флоранса

Принцип метода

С НСl уробилин образует соединение, окрашенное в красный цвет.

Необходимые реактивы

1. Серная кислота концентрированная.

2. Диэтиловый эфир.

3. НСl концентрированная.

Ход исследования

Мочу в количестве 8–10 мл подкисляют в пробирке 8–10 каплями концентрированной серной кислоты, перемешивают, затем приливают 2–3 мл эфира и, закрыв пробирку пробкой, несколько раз осторожно пропускают эфир через слой мочи для экстрагирования уробилина. Затем эфирную вытяжку мочи наслаивают, лучше пастеровской пипеткой, на 2–3 мл концентрированной НСl, налитой в другую пробирку. При наличии уробилина на границе жидкостей образуется розовое кольцо. Интенсивность окраски пропорциональна количеству уробилина.

Проба настолько чувствительна, что даже в норме на границе между двумя жидкостями видно легкое розовое окрашивание. Этой пробой можно установить полное отсутствие уробилиноидов в моче.

Унифицированная проба Богомолова

Принцип метода

Уробилин с сульфатом меди образует соединение красно-розового цвета.

Необходимые реактивы

1. Меди сульфат, насыщенный раствор: 23 г CuSO4 × 5H2O растворяют в 100 мл дистиллированной воды.

2. Хлороформ.

Ход исследования

К 10–15 мл мочи приливают 2–3 мл насыщенного раствора сульфата меди.

Если образуется помутнение, то прибавляют несколько капель концентрированной НСl до прояснения раствора. Через 5 мин приливают 2–3 мл хлороформа и, закрыв пробирку пробкой, несколько раз встряхивают.

Если хлороформ окрашивается в розовый цвет, то концентрация уробилина в моче выше нормальной.

Унифицированная бензальдегидная проба Нейбауэра

Проба основана на том, что уробилиногеновые тела с пара-диметиламинобензальдегидом (реактив Эрлиха) дают соединение красной окраски.

Необходимые реактивы

Реактив Эрлиха – 2 г парадиметиламинобензальдегида растворяют в 100 мл 20%-ного раствора соляной кислоты.

Ход исследования

К 3–4 мл свежевыпущенной мочи, охлажденной до комнатной температуры, прибавляют 3–4 капли реактива Эрлиха (1 каплю на 1 мл мочи). Окрашивание жидкости в красный цвет в течение первых 30 с говорит об увеличенном содержании уробилиногена в моче; если окрашивание развивается по прошествии 30 с, то концентрация уробилина в моче нормальная, а если через 30 с окраска не развивается,