Анализы. Полный медицинский справочник. Ключевые лабораторные исследования в одной книге - Коллектив авторов

50%-ные спирты и дистиллированную воду. Затем 6 мин гематоксилином Гарриса осторожно споласкивают дистиллированной водой и погружают (6 раз) в 0,25%-ный раствор соляной кислоты.

Далее на 6 минут кладут в сосуд с проточной водопроводной водой и обмывают дистиллированной водой. Затем проводят через 50, 70, 80 и 95%-ные спирты. Обезвоженные таким образом препараты окрашивают в течение 1,5 мин краской оранжевой Г, споласкивают в двух сменах 95%-ного спирта и красят в течение 1,5 мин составной краской (ЕА-36). Мазки отмывают от избытка краски в трех сменах 95%-ного спирта. Далее препараты просветляют проведением через абсолютный спирт, через смесь абсолютного спирта и ксилола в равных объемах и наконец через ксилол, после чего заключают в канадский бальзам.

Из приведенных выше окрасок самые простые – окраска фуксином и метиленовым синим, но эти окраски не дают полного представления обо всей цитологической картине. Метод Папаниколау сложен, требует много дефицитных и дорогостоящих реактивов, поэтому реже используется в практической работе лабораторий. Окраска по Романовскому вполне пригодна для цитологического исследования влагалищных мазков и выгодно отличается тем, что может применяться в любой лаборатории.

Клеточный состав влагалищного мазка

В мазках из влагалища различают 4 вида клеток плоского эпителия.

1. Клетки поверхностные большие (35–55 мк), полигональной формы, ядро маленькое (6 мк), пикнотичное. Клетки чаще располагаются раздельно. Цитоплазма клеток очень слабо окрашивается, ядро темное. В большом количестве встречаются главным образом с 9 по 14-й день менструального цикла.

2. Промежуточные клетки большие (25–30 мк), форма неправильная, ядро более крупное, круглое или овальное. Клетки часто располагаются пластами. Цитоплазма окрашивается интенсивнее, чем у поверхностных клеток, ядро более светлое. Встречаются во всех фазах менструально-овариального цикла.

3. Парабазальные клетки – меньших размеров, круглой или овальной формы, с большим круглым ядром. Диаметр ядра немного меньше, чем ширина ободка цитоплазмы. Окрашиваются чаще в базофильные тона. Иногда морфологические черты парабазальных клеток неясно отличимы от клеток базальных.

4. Клетки базальные (или атрофические) – округлой формы, несколько меньших размеров, чем парабазальные, ядро круглое, большое, занимает большую часть клетки. Цитоплазма окрашивается в интенсивные базофильные тона (некоторые авторы называют клетки с такой морфологией парабазально-базальными). Клетки встречаются во время менопаузы и единичные во время менструаций и после родов.

Слизистая оболочка влагалища в норме выстлана многослойным плоским эпителием. В зависимости от соотношения клеток разных слоев эпителия в мазках различают 4 типа клеточных реакций, которые позволяют судить о функциональном состоянии яичников.

1. Много базальных клеток и большое количество лейкоцитов. Этот тип мазка указывает на резкую недостаточность гормонов яичников (эстрогенов).

2. В мазке значительное количество базальных клеток, довольно много промежуточных, значительное количество лейкоцитов. Соответствует умеренно выраженной недостаточности гормонов.

3. В мазке преобладают промежуточные клетки, иногда нечетко контурированные, могут лежать пластами. Базальных клеток немного. Такая картина мазка указывает на легкую степень недостаточности эстрогенов.

4. Мазок состоит из поверхностных клеток. Такой тип мазка соответствует достаточной секреции эстрогенов.

Исследование влагалищного мазка нельзя производить при наличии воспалительных процессов (выделений), после влагалищных манипуляций, при внутривлагалищном применении медикаментов. После полового сношения мазки берут не раньше чем через 24 ч.

Тест влагалищного мазка применяется для установления показаний и контроля над результатами гормонотерапии. У женщин с нормальным овариально-менструальным циклом картина влагалищных мазков в зависимости от фазы цикла может быть третьей или четвертой (фаза пролиферации – третий тип реакции, в период овуляции и в ближайшие дни после нее – третий или четвертый).

Для решения вопроса о функциональном состоянии яичников применяют ряд цитохимических (определение гликогена и ферментов в клетках) и биохимических методов (определение ферментов во влагалищном содержимом, кислотности, молочной кислоты и др.).

Для исследования влагалищных мазков также используется люминесцентная и фазовоконтрастная микроскопия, данные которой дополняют трактовку функционального состояния яичников. Для более правильной оценки влагалищного мазка, кроме вида клеток и их количества, учитывают так называемые индексы; наибольшее значение они имеют для суждения о нарушении функции яичников. К таким индексам относятся:

1) кариопикнотический индекс – отношение числа поверхностных клеток с пикнотическими ядрами к общему числу клеток мазка;

2) атрофический индекс (индекс глубоких клеток) – отношение числа базальных и парабазальных клеток к общему числу клеток мазка;

3) индекс промежуточных клеток – отношение числа промежуточных клеток к общему числу клеток мазка;

4) эозинофильный индекс – отношение числа ацидофильных поверхностных клеток к общему числу базофильных поверхностных клеток.

При изучении цитологической картины влагалищного мазка можно использовать упрощенную схему Видаля (табл. 45).

Таблица 45

Оценка кольпоцитограммы

В настоящее время цитологический метод оценки функции яичников заменяется определением концентрации половых гормонов в крови.

Наибольшее значение имеет кариопикнотический индекс, показатели которого наиболее точно совпадают с уровнем выделения с мочой половых гормонов (табл. 46).

Таблица 46

Показатели кариопикнотического индекса в течение овуляторного менструального цикла

Исследование на клетки новообразований

Материал, взятый из влагалища путем отсоса пипеткой с пораженного участка (эрозии, язвы), тампоном или путем отпечатка, может служить для обнаружения клеток злокачественных опухолей. Из полученного отделяемого приготавливают тонкие препараты и красят по Романовскому или другими методами, принятыми в цитологии. Если количество полученного материала достаточное, просматривают предварительно нативные препараты.

Исследование влагалищного содержимого на степень чистоты

Мазки для исследования на влагалищную палочку (палочку Деферлейна) готовят так же, как для цитологического исследования. Окрашивают по Граму.

Окраска по Граму

Необходимые реактивы

1. Карболовый раствор генцианвиолета (1 г генцианвиолета растворяют в 10 мл 96%-ного спирта, раствор выливают в 100 мл 1–2%-ной карболовой кислоты, взбалтывают).

2. Раствор Люголя (1 г йода, 2 г йодистого калия и 300 мл дистиллированной воды; йод и йодистый калий растворяют сначала в 5–8 мл воды, а затем приливают остальную воду).

3. 96%-ный спирт или сырец.

4. 40%-ный раствор карболового фуксина (10 мл карболового фуксина и 90 мл дистиллированной воды).

Ход окраски

На фиксированный препарат кладут полоску фильтровальной бумаги и наливают раствор генцианвиолета. Окрашивают в течение 1,5–2 мин. Бумажку сбрасывают и заливают препарат раствором Люголя на 2 мин. Раствор Люголя сливают и прополаскивают препарат в спирте до сероватого цвета. Промывают водой и окрашивают 10%-ным раствором карболового фуксина в течение 10–15 с. Снова промывают водой, высушивают препарат на воздухе.

По своей морфологии палочка Деферлейна грубая, толстая, грамположительная. Различают 4 степени чистоты влагалища (см. выше).

Основным условием для существования влагалищной палочки является высокая степень кислотности (рН 4,0–4,7). Во влагалищном содержимом и в эпителии содержится в большом количестве гликоген.

Существует тесная связь между рН влагалища и количеством гликогена.