Большой справочник анализов - Андрей Пенделя

Иммунологическое определение компонентов системы гемостаза выполняется методами иммунопреципитации, иммуноэлектрофореза, радиоиммунологическими и другими с соответствующими антисыворотками. При этом оценивается содержание в плазме крови антигена того или иного фактора свертывания (или его фрагментов), а не функциональная активность, которая может быть резко сниженной при нормальном содержании антигена в плазме. Такая ситуация характерна для всех случаев, когда в организме синтезируются аномальные (функционально неполноценные) факторы, сохраняющие свою антигенность, но лишенные способности участвовать в гемостазе.

Определение основных физиологических антикоагулянтов. Наиболее важное значение имеет определение активности основного физиологического антикоагулянта – антитромбина III. Его снижение может быть генетически обусловленным (первичная тромбофилия) либо вторичным вследствие интенсивного потребления (ДВС-синдром, массивные тромбозы) или ускоренного метаболизма (лечение гепарином, L-аспарагиназой, синтетическими контрацептивными средствами) и блокады иммунными комплексами, парапротеинами, фибронектином, белками острой фазы. В любом случае снижение активности антитромбина III ниже 60–65 % поддерживает внутрисосудистое свертывание крови, делает менее выраженным антикоагулянтное действие гепарина. Вместе с тем очень часто между уровнем антитромбина III и снижением чувствительности к гепарину нет закономерного соответствия. При этом обычно ослабление антикоагулянтного действия гепарина существенно преобладает над степенью снижения активности антитромбина III.

Исследование фибринолиза. Важно выявление как повышения фибринолитической активности крови, так и ее снижения, что может быть связано либо с интенсивным потреблением плазминогена и его активаторов при их активации и фиксации в сгустках и тромбах, либо с повышением антиплазминовой и антиактиваторной активности плазмы (табл. 11).

Таблица 11. Фибриноген и фибрин

Повышенное значение фибриногена наблюдается при воспалительных и некротических процессах, лихорадке, инфекционных заболеваниях, хирургических вмешательствах, диффузных болезнях соединительной ткани, нефрите, ожогах, травмах, лучевой болезни, пароксизмальной ночной гемоглобинурии, уремическом синдроме, инфаркте миокарда, злокачественных опухолях. Физиологическое повышение значения фибриногена наблюдается при беременности и во время менструации. Пониженное значение фибриногена наблюдается при состояниях после кровотечения, циррозе печени, ожогах, отравлении гепатотропными ядами, врожденном дефиците фибриногена, цинге, тяжелом токсикозе беременных, ДВС-синдроме, травмах, эмболии околоплодными водами, действии фенобарбитала, урокиназы и стрептокиназы, шоковых состояниях, кахексии, укусе змеи.

Исследование фибринолитической активности эуглобулиновой фракции плазмы. Это один из важнейших базисных тестов. С помощью эуглобулиновых тестов оценивается содержание в плазме крови плазминогена и его активаторов. При получении крови в условиях основного обмена, то есть утром натощак, до подъема больного с постели, тканевых активаторов плазминогена в крови почти нет. Следовательно, в таких условиях определяется в основном состояние внутреннего (собственно кровяного) процесса активации плазминогена. Удлинение времени фибринолитической активности наблюдается при геморрагическом васкулите, апластических процессах кроветворения, тромбозе. Сокращение времени фибринолитической активности наблюдается при ацидозе, ДВС-синдроме, циррозе печени, шоковых и стрессовых состояниях, гипоксии, сильных физических нагрузках, хирургических операциях на легких, матке, простате, мозге, при осложнениях после родов.

Способность эндотелия сосудов выделять в кровь внешний активатор фибринолиза (активатор тканевого типа – АТТ) оценивается по ускорению эуглобулинового лизиса после сжатия сосудов манжетой от аппарата для измерения артериального давления, либо после дозированной физической нагрузки на велоэргометре, либо при фармакологической стимуляции (производными вазопрессина – десмопрессином или адиуретином). В этих случаях второй раз кровь на исследование берется из пережатых сосудов до снятия манжеты. С помощью таких проб может быть изучено влияние компрессии не только на фибринолиз, но и на другие антитромботические свойства стенок сосудов (антикоагулянтные, антиагрегационные).

Нагрузочные пробы стандартизируются таким образом, чтобы в норме эуглобулиновый лизис ускорялся в 2 раза и более (выполнение исследования не в условиях основного обмена приводит к очень большим случайным ошибкам, поэтому до начала исследования больной утром не должен вставать с постели, венопункция должна проводиться в палате). Ослабление реакции на компрессию или нагрузку свидетельствует о недостаточной реактивности фибринолитической системы и повышенном тромбогенном риске, что подтверждено рядом исследований.

Ретракция кровяного сгустка – самопроизвольное отделение сыворотки крови от ее сгустка при отстаивании. Повышенный показатель ретракции кровяного сгустка наблюдается при анемии, гиперфибриногенемии. Пониженный показатель ретракции кровяного сгустка наблюдается при тромбоцитопении, геморрагической алейкии Франка, эритремии, увеличении гематокрита, болезни Верльгофа.

Как и при исследовании свертывающей системы крови, эти данные могут быть существенно дополнены иммунологическим определением компонентов системы фибринолиза и продуктов расщепления фибриногена и фибрина.

Методы выявления маркеров («свидетелей») внутрисосудистого свертывания крови и фибринолиза. В процессе внутрисосудистого свертывания крови и сопряженного с ним интенсивного фибринолиза происходит, с одной стороны, потребление и более или менее выраженное снижение уровня в крови ряда компонентов системы гемостаза, а с другой – появление их частей, осколков и метаболитов, которые в нормальной плазме крови отсутствуют или содержатся в небольшом количестве. Выявление таких маркеров активации внутрисосудистого свертывания и фибринолиза имеет важное диагностическое значение при ДВС-синдромах, тромбоэмболических заболеваниях и микротромбоваскулитах различного генеза (инфекционного, иммунного, опухолевого).

К маркерам потребления и активации тромбоцитарного звена гемостаза относятся тромбоцитопения, повышение уровня в плазме компонентов гранул – антигепаринового фактора тромбоцитов, а также сохранение в циркуляции функционально менее активных и хуже агрегирующих кровяных пластинок.

Основные маркеры повреждения и функциональной неполноценности эндотелия сосудов – повышение уровня в плазме крови фактора Виллебранда, ослабление реакции эуглобулинового лизиса при компрессии сосудов манжетой, физической нагрузке или введении аналогов вазопрессина.

Гиперкоагуляция может служить признаком активации свертывающей системы крови. Выявляется она с помощью общих коагуляционных тестов и инструментальных методов исследования (тромбоэластографии), а в клинике – на основании трудности получения крови из вены: легкого тромбирования как самого сосуда, так и игл.

Этаноловый тест специфичен, дает положительный результат при ДВС, тромбозах и других видах тромбинемии. В III стадии ДВС на фоне выраженной гипофибриногенемии (менее 0,5–0,7 г/л), как и при гепаринизации, этаноловый тест часто становится отрицательным.

Ортофенантролиновый тест (ОФТ) высокоинформативен, позволяет проводить качественное и количественное определение растворимых фибрин-мономерных комплексов (РФМК) в плазме с небольшим количеством тромбоцитов. Полученные результаты (в секундах) переводят с помощью калибровочной кривой в количество РФМК. В норме хлопья появляются через 120 с; чем быстрее они появляются, тем больше РФМК содержится в исследуемой плазме.

Помимо вышеуказанных тестов может применяться тест склеивания стафилококков (ТСС, стафилококковый клампинг-тест) – простой и высокоинформативный метод выявления в сыворотке РФМК и ранних продуктов фибринолиза (фрагментов X, а также связанного с ними заблокированного фибриногена). У здоровых людей содержание РФМК и ранних ПДФ в сыворотке не превышает 0,002 г/л (2 мкг/мл). Пригоден для экспресс-диагностики активации системы гемостаза при ДВС-синдромах, тромбоэмболиях и пр.

Определение содержания в плазме крови активированного фактора XIII как показателя циркуляции в крови тромбина. Фактор XIII, активируемый тромбином в присутствии ионов кальция, расщепляется на цепь А, обладающую фибринстабилизирующей активностью, и инертную цепь S.