Анализы. Полный медицинский справочник. Ключевые лабораторные исследования в одной книге - Коллектив авторов

Проникнув иглой-троакаром в мягкие ткани, нащупывают концом заостренного мандрена место кости, где должен быть произведен прокол. Иглу вводят в костную ткань под некоторым давлением вращательными движениями. При появлении ощущения прочной фиксации иглы мандрен извлекают. Разъединив мандрен и ручку, последнюю вновь навинчивают на иглу, зафиксированную в кости.

Производя вращательное движение по часовой стрелке, иглу без большого труда удается ввести в спонгиозное вещество костной ткани. После этого вращательным движением иглу извлекают. Цилиндрический столбик костной ткани, находящейся в игле, выталкивают мандреном из просвета иглы на предметное стекло, а оттуда переносят в банку с формалином и отправляют на гистологическое исследование. Из оставшегося на стекле, в игле и на мандрене костного мозга делают мазки. Чаще всего удается вырезать и извлечь кусочек костной ткани длиной от 6 до 10 мм, иногда больше.

Трепанат (спонгиозная костная ткань) у здоровых людей и у больных с гиперпластическими процессами богат костным мозгом. При тяжелых апластических процессах трепанат имеет желтый цвет, что обусловливается почти полным исчезновением костномозговых элементов и заменой их жировой тканью.

При всех формах остеомиелосклероза и миелофиброза извлеченный кусочек костной ткани выглядит нередко «сухим», и из него удается извлечь лишь очень небольшое количество костного мозга для приготовления мазков.

Исследование клеток

Определение количества клеток в пунктате

Пунктат костного мозга на часовом стекле осторожно растирают стеклянной палочкой и быстро насасывают в смеситель для эритроцитов, набирают 3–5%-ный раствор уксусной кислоты (разведение костного мозга можно также производить пробирочным методом по Николаеву). После этого поступают так же, как при подсчете лейкоцитов крови.

Общее количество ядерных элементов колеблется в больших пределах, по-видимому, вследствие неодинакового состава костномозговой ткани в различных участках и различной примеси периферической крови в пунктате. У здоровых людей количество костномозговых клеток составляет от 45 тыс. до 250 тыс. в 1 мкл.

Миелограмма представляет собой процентное отношение клеточных элементов в мазках, приготовленных из пунктатов костного мозга. Мазки пунктата костного мозга просматривают сначала с малым увеличением и отбирают те, которые содержат наибольшее количество клеток. При малом увеличении нужно тщательно просмотреть по возможности все мазки для выявления комплексов атипических клеток, клеток Березовского—Штернберга, клеток Пирогова—Лангханса и др. При этом же увеличении нужно обратить внимание на количество мегакариоцитов: есть ли они в мазках, много их или мало.

В тех случаях, когда в мазке не обнаруживают или находят единичные мегакариоциты, необходимо тщательно просмотреть конец мазка в «метелочке», где они иногда собираются в большом количестве. После тщательного просмотра мазков приступают к дифференциальному подсчету клеток костного мозга. Подсчитывают не менее 500 клеток и вычисляют процент каждого вида клеток.

Подсчет можно производить двумя способами:

1) метод Коста. Считают отдельно клетки лейкопоэза и эритропоэза. Сосчитывают 500 (или 1000) клеток лейкопоэза, а количество клеток красной крови вычисляют на 100 клеток лейкопоэза;

2) метод Аринкина. Считают подряд все клетки костного мозга и вычисляют процент каждого вида клеток.

При оценке пунктата костного мозга, кроме количества подсчитанных клеток, необходимо учитывать и соотношение между молодыми и более зрелыми формами нейтрофилов – так называемый костномозговой индекс созревания нейтрофилов. В норме этот индекс меньше 1 и равен 0,6–0,8.

При оценке миелограммы необходимо знать динамику периферической крови и состояние больного. Помимо количественных сдвигов клеток лейкопоэза и эритропоэза, надо учитывать степень их созревания. При увеличении эритробластических и лейкобластических элементов с задержкой их созревания в периферической крови может наблюдаться уменьшение количества лейкоцитов и эритроцитов. В других же случаях (например, при эритремии) в костном мозге отмечаются увеличенное количество нормобластов без нарушения их созревания и увеличение числа эритроцитов в крови.

При оценке пунктата костного мозга очень важно отношение количества элементов лейкопоэза к числу ядерных элементов эритробластического ряда. У здоровых людей это соотношение составляет 4 : 1 или 3 : 1.

Если количество костномозговых клеток увеличивается в основном за счет клеток эритропоэза, это указывает на гиперплазию последнего, и соотношение лейко / эритро уменьшается, достигая величины 1 : 1 и меньше. Такая картина наблюдается при различных формах малокровия (постгеморрагической, гемолитической и В12-дефицитной анемиях).

При нелеченной анемии Аддисона—Бирмера количество клеток увеличивается преимущественно за счет мегалобластов, а в начале ремиссии – за счет эритронормобластов. При этом соотношение лейко / эритро достигает 1 : 8. При полной ремиссии оно приближается к норме.

При уменьшении количества клеток в костном мозге уменьшение соотношения лейко / эритро может быть и не связано с гиперплазией эритропоэза, а является следствием уменьшения образования клеток гранулопоэза. Такая картина встречается при агранулоцитозе.

При одновременном уменьшении числа клеток лейкопоэза и эритропоэза может сохраниться нормальное соотношение между ними, и в то же время оба указанных выше ростка будут подавлены.

Подобное состояние встречается при гипо– и апластических процессах.

Резкое увеличение количества костномозговых элементов с увеличением соотношения лейко / эритро свидетельствует о гиперплазии миелоидных элементов, встречается при лейкозах, инфекциях, интоксикациях и других состояниях.

Для количественной оценки мегакариоцитов используют следующие методы:

1) подсчет в камере;

2) подсчет в мазках: по полям зрения, по отношению к количеству всех ядерных клеток костного мозга.

Все эти методы не являются достаточно точными. Наиболее точное количественное представление дает подсчет их в срезах костного мозга, полученного при трепанобиопсии.

Подсчет в счетной камере. При разведении пунктата костного мозга уксусной кислотой (1 : 20) происходит гемолиз эритроцитов, позволяющий производить подсчет мегакариоцитов в счетной камере. Разведение пунктата костного мозга и методика подсчета аналогичны подсчету лейкоцитов в крови.

Подсчет производят на всей поверхности сетки, затем число сосчитанных мегакариоцитов умножают на разведение (20) и делят на объем камеры (3,2).

Мегакариоциты в камере видны в виде крупных клеток с полиморфным гиперсегментированным ядром и широкой зоной цитоплазмы. Недостаточная точность метода обусловлена тем, что в камере не распознаются мелкие формы (мегакариобласты, голые ядра и др.), которые не попадают в счет. Преимущество метода – равномерное распределение клеток в счетной камере. У здорового человека в 1 мкл пунктата костного мозга при подсчете в счетной камере обнаружено (по данным разных авторов) 63 ± 10 и 83 ± 13,86 мегакариоцитов. У здоровых детей в возрасте от 5 месяцев до 3 лет общее количество мегакариоцитов составляет около 116 ± 10,8 в 1 мкл пунктата.

Подсчет в мазках по полям зрения. В мазках пунктата костного мозга подсчитывают мегакариоциты при малом увеличении микроскопа с выведением средних цифр.

Неточность метода обусловлена тем, что в мазках мегакариоциты располагаются неравномерно, сосредоточиваясь больше по краям препарата и в конце мазка. У здорового человека в мазках пунктата костного мозга в 250 полях зрения содержится 5–12 мегакариоцитов.

Подсчет