Анализы. Полный медицинский справочник. Ключевые лабораторные исследования в одной книге - Коллектив авторов

0,9%-ным раствором натрия хлорида. Степень разведения ориентировочно устанавливают по реакции с сульфосалициловой кислотой. После этого готовят основное разведение выпотных жидкостей 1 : 100, для чего к 0,1 мл экссудата или транссудата добавляют 9,9 мл 0,9%– ного раствора натрия хлорида. При необходимости (большое содержание белка) степень разведения можно увеличить. В пробирку вносят 1,25 мл разведенной жидкости и 3,75 мл 3%-ного раствора сульфосалициловой кислоты, содержимое перемешивают. Через 5 мин фотометрируют при длине волны 590–650 нм (оранжевый или красный светофильтр) в кювете с длиной оптического пути 0,5 см против контрольной пробы, в которую вместо сульфосалициловой кислоты вносится 3,75 мл 0,9%-ного раствора натрия хлорида.

Расчет производят по калибровочному графику с учетом разведения пробы (табл. 50). Для построения графика из стандартного раствора альбумина готовят разведения и обрабатывают их как опытные пробы.

Таблица 50

Построение калибровочного графика

Примечание

Прямолинейная зависимость калибровочного графика сохраняется до концентрации белка 1000 мг/мл. В экссудатах содержится от 30 до 80 г/л белка, тогда как в транссудатах – 5–25 г/л.

Проба Ривальта была предложена также для дифференцирования транссудатов и экссудатов.

Принцип метода

Транссудаты содержат серомуцин (соединение глобулиновой природы), дающий положительную пробу (денатурацию) со слабым раствором уксусной кислоты.

Ход определения

В цилиндр наливают 100–150 мл дистиллированной воды, подкисляют 2–3 каплями ледяной уксусной кислоты и добавляют по каплям исследуемую жидкость. Падающая капля экссудата образует помутнение в виде белого облачка, опускающегося до дна сосуда. Капля транссудата не образует помутнения, или оно бывает незначительным и быстро растворяется. Несмотря на указанные различия экссудатов и транссудатов, разграничить их на практике не всегда легко, так как иногда приходится иметь дело с рядом переходных жидкостей, а также экссудатами, которые по содержанию белка и относительной плотности стоят близко к транссудатам. Предложенная таблица 51 поможет разобраться в отличиях выпотных жидкостей.

Таблица 51

Отличие транссудата от экссудата

Большое значение для различения транссудатов и экссудатов имеет микроскопическое исследование.

Микроскопическое исследование

Микроскопическое исследование позволяет детально изучить клеточный состав пунктата. Цитологическому исследованию подвергаются препараты, полученные из осадка после центрифугирования жидкости.

Экссудаты, доставленные в лабораторию в свернувшемся виде, подвергаются дефибринированию путем взбалтывания стеклянными бусами. До окраски препараты рекомендуется изучить в нативном виде под покровным стеклом.

Нативные препараты

Исследование нативных препаратов дает возможность ориентировочно оценить количество клеточных элементов, качественный состав осадка, наличие подозрительных на атипичные клетки конгломератов и др. Техника приготовления препаратов обычная: каплю осадка наносят на предметное стекло и накрывают покровным. Препараты рассматриваются сначала под малым, а затем под большим увеличением. При исследовании на клетки злокачественного новообразования жидкость центрифугируют повторно не менее 5–6 раз, сливая надосадочный слой после каждого центрифугирования и вновь наливая исследуемую жидкость. В нативном препарате можно обнаружить определенные элементы.

Эритроциты в том или ином количестве присутствуют в любой жидкости. В транссудатах и серозных экссудатах их выявляют в небольшом количестве; в геморрагических экссудатах они обычно покрывают все поле зрения. Это значительно затрудняет исследование нативных препаратов.

В этих случаях надо готовить тонкие препараты или добавлять каплю слабого раствора уксусной кислоты (для гемолиза эритроцитов), но такой препарат в дальнейшем окрашивать нельзя.

При раневых гемотораксах представляет практический интерес изучение эритрограммы. Увеличение числа старых дегенеративных эритроцитов (микроформы, «тени» эритроцитов, пойкилоциты и др.) указывает на прекращение кровотечения: появление на их фоне свежих эритроцитов свидетельствует о повторном его возникновении.

Лейкоциты в небольшом количестве (до 15 в поле зрения) обнаруживаются в транссудатах и в большом количестве в жидкостях воспалительного происхождения (особенно много в гнойном экссудате). Качественный состав лейкоцитов (соотношение отдельных видов) изучают в окрашенных препаратах.

Клетки мезотелия распознают по большим размерам (25–40 мкм), округлой или полигональной форме. В транссудате большой давности эти клетки встречаются в виде скоплений, претерпевают дегенеративные изменения – вакуолизацию цитоплазмы и оттеснение ядра к периферии по типу перстневидных клеток. Они обнаруживаются в начальных стадиях воспалительного процесса, при реактивном воспалении плевры, а также при опухолях.

Опухолевые клетки можно заподозрить по расположению конгломератов, отсутствию четких клеточных структур, полиморфизму величины и формы. Они появляются при карциноме плевры.

Слизь обнаруживается крайне редко и является указанием на наличие бронхопульмонального свища.

Жировые капли в виде резко преломляющих свет круглых образований, окрашивающихся Суданом 3 в оранжевый цвет, встречаются в гнойных экссудатах с клеточным распадом и в больших количествах в хилезных экссудатах.

Кристаллы холестерина – это тонкие прозрачные пластинки с обрезанными углами. Обнаруживаются в старых осумкованных выпотах, чаще туберкулезной этиологии.

Друзы актиномицетов можно найти в плевральном экссудате при актиномикозе.

Окрашенные препараты

Техника приготовления препаратов проста. Небольшую каплю осадка распределяют по предметному стеклу и высушивают на воздухе. Окраску производят после фиксации мазков обычными гематологическими методами, однако время окрашивания сокращается до 10 мин и меньше. Окрашенный препарат рассматривают сначала с сухой, а затем с иммерсионной системой, изучают морфологию клеточных элементов, подсчитывают соотношение отдельных видов. В окрашенных препаратах дифференцируются следующие клеточные элементы.

Нейтрофилы присутствуют в экссудатах любой этиологии. В серозных экссудатах туберкулезной этиологии они обнаруживаются в небольшом количестве в начальной стадии развития экссудата (примерно в течение первых 10 дней), а затем количество их постепенно уменьшается за счет лимфоцитов. Если нейтрофилез держится длительное время, это является признаком тяжелого течения заболевания; появление преобладающего количества нейтрофилов указывает на переход серозного экссудата в гнойный. В гнойных экссудатах нейтрофилы являются преобладающими клетками.

В более доброкачественных случаях (при серозно-гнойном характере жидкости) многие нейтрофилы сохранены, функционально активны, хорошо выполняют функцию фагоцитоза, в более тяжелых случаях (при отчетливо гнойном характере экссудата) обнаруживают признаки дегенерации: токсическую зернистость цитоплазмы, резкий пикноз ядра, кариолизис вплоть до полного клеточного распада. При благоприятном течении заболевания по мере просветления экссудата количество дегенеративных форм уменьшается, увеличивается число активных нейтрофилов, появляются различные тканевые клетки (макрофаги, мезотелиальные клетки и др.).

Лимфоциты являются обязательными элементами всякого экссудата. В серозных экссудатах в разгар клинических проявлений они превалируют в цитологической картине, составляя 80–90% всех лейкоцитов. Морфология лейкоцитов различна, наряду с малыми формами встречаются и более крупные клетки.

Эозинофилы содержатся иногда в серозных геморрагических экссудатах, при плевритах различной этиологии, в частности ревматических, иногда туберкулезных, опухолевых, а также в период рассасывания раневого плеврита, составляя 20–80% всех клеточных элементов.

Плазматические клетки могут встречаться в значительном количестве при затяжном характере воспаления серозных оболочек.

Полибласты – это тканевые клетки разнообразной величины и размера с базофильной цитоплазмой и нежным ядром овальной или бобовидной формы, иногда с наличием нуклеолы.

Макрофаги морфологически